פּקר אַנאַליזער טראָובלעשאָאָטינג: אָפט געשטעלטע פֿראגן און סאַלושאַנז

פּאָלימעראַסע קייט רעאַקציע (PCR) אַנאַליזערז זענען יקערדיק מכשירים אין מאָלעקולאַר ביאָלאָגי, אַלאַוינג ריסערטשערז צו פאַרגרעסערן דנאַ פֿאַר אַפּלאַקיישאַנז ריינדזשינג פון גענעטיק פאָרשונג צו קליניש דיאַגנאָסטיקס. אָבער, ווי קיין קאָמפּלעקס מיטל, אַ פּקר אַנאַליזער קענען טרעפן פּראָבלעמס וואָס ווירקן זייַן פאָרשטעלונג. דער אַרטיקל אַדרעסז עטלעכע פּראָסט פֿראגן וועגןפּקר אַנאַליזערטראָובלעשאָאָטינג און גיט פּראַקטיש סאַלושאַנז צו פּראָסט פּראָבלעמס.

1. פארוואס איז מיין פּקר אָפּרוף נישט אַמפּלאַפייינג?

איינער פון די מערסט פּראָסט פּראָבלעמס פון יוזערז איז די ינאַביליטי פון די פּקר אָפּרוף צו אַמפּלאַפיי די ציל דנאַ. דאָס קען זיין אַטריביאַטאַד צו עטלעכע סיבות:

פאַלש אָנפאַנגער פּלאַן: מאַכן זיכער דיין אָנפאַנגער זענען ספּעציפיש פֿאַר די ציל סיקוואַנס און האָבן אַ אָפּטימאַל מעלטינג טעמפּעראַטור (טם). ניצן ווייכווארג מכשירים פֿאַר אָנפאַנגער פּלאַן צו ויסמיידן ניט-ספּעציפיש ביינדינג.

ניט גענוגיק מוסטער דנאַ: באַשטעטיקן אַז איר נוצן אַ גענוג סומע פון ​​דנאַ מוסטער. צו קליין וועט רעזולטאַט אין שוואַך אָדער קיין אַמפּלאַפאַקיישאַן.

ינכיבאַטערז אין דער מוסטער: קאַנטאַמאַנאַנץ אין די מוסטער קענען ינכיבאַט די פּקר אָפּרוף. באַטראַכטן רייניקונג דיין דנאַ אָדער ניצן אַ אַנדערש יקסטראַקשאַן אופֿן.

לייזונג: קאָנטראָלירן דיין אָנפאַנגער פּלאַן, פאַרגרעסערן מוסטער קאַנסאַנטריישאַן און מאַכן זיכער אַז דיין מוסטער כּולל קיין ינכיבאַטערז.

2. פארוואס איז מיין פּקר פּראָדוקט די אומרעכט גרייס?

אויב דיין PCR פּראָדוקט גרייס איז נישט ווי דערוואַרט, עס קען אָנווייַזן אַ פּראָבלעם מיט די אָפּרוף טנאָים אָדער ינגרידיאַנץ געניצט.

ניט-ספּעציפיש אַמפּלאַפאַקיישאַן: דאָס קען פּאַסירן אויב אַ אָנפאַנגער ביינדז צו אַן אַנינטענדיד פּלאַץ. קאָנטראָלירן די ספּעציפֿישקייט פון די פּרימערז מיט אַ געצייַג אַזאַ ווי BLAST.

פאַלש אַנילינג טעמפּעראַטור: אויב די אַנילינג טעמפּעראַטור איז צו נידעריק, ניט-ספּעציפיש ביינדינג קען רעזולטאַט. אָפּטימיזאַטיאָן פון אַנילינג טעמפּעראַטור דורך גראַדיענט פּקר.

לייזונג: באַשטעטיקן אָנפאַנגער ספּעסיפיקאַטי און אַפּטאַמייז אַנילינג טעמפּעראַטור צו פֿאַרבעסערן די אַקיעראַסי פון פּקר פּראָדוקטן.

3. מיין פּקר אַנאַליזער דיספּלייז אַ טעות אָנזאָג. וואָס זאָל איך טאָן?

טעות אַרטיקלען אויף אַ פּקר אַנאַליזער קענען זיין אַלאַרמינג, אָבער זיי קענען אָפט צושטעלן קלוז צו פּאָטענציעל פּראָבלעמס.

קאַלאַבריישאַן ישוז: מאַכן זיכער אַז די פּקר אַנאַליזער איז קאַלאַברייטיד ריכטיק. רעגולער וישאַלט און קאַלאַבריישאַן טשעקס זענען קריטיש צו באַקומען פּינטלעך רעזולטאַטן.

ווייכווארג גרופּע: יז, ווייכווארג באַגז קענען גרונט פּראָבלעמס. ריסטאַרט דיין קאָמפּיוטער און טשעק פֿאַר ווייכווארג דערהייַנטיקונגען.

לייזונג: אָפּשיקן צו די באַניצער מאַנואַל פֿאַר די ספּעציפיש טעות קאָד און נאָכגיין די רעקאַמענדיד טראָובלעשאָאָטינג סטעפּס. רעגולער וישאַלט קענען פאַרמייַדן פילע פּראָבלעמס.

4. פארוואס זענען מיין PCR אָפּרוף רעזולטאַטן סתירה?

ינקאַנסיסטענט פּקר רעזולטאַטן קענען זיין פראַסטרייטינג פֿאַר עטלעכע סיבות:

רעאַגענט קוואַליטי: ענשור אַז אַלע רייידזשאַנץ, אַרייַנגערעכנט ענזימעס, באַפערז און דנטפּס, זענען פריש און פון הויך קוואַליטעט. אויסגעגאנגען אָדער קאַנטאַמאַנייטאַד רייידזשאַנץ קען פאַרשאַפן וועריאַביליטי.

טערמאַל סיקלער קאַלאַבריישאַן: ינקאַנסיסטענט טעמפּעראַטור סעטטינגס קען ווירקן די פּקר פּראָצעס. קעסיידער קאָנטראָלירן די קאַלאַבריישאַן פון די טערמאַל סייקאַלער.

לייזונג: ניצן הויך-קוואַליטעט רייידזשאַנץ און קאַלאַברייטיד דיין טערמאַל סייקאַלז קעסיידער צו ענשור קאָנסיסטענט רעזולטאַטן.

5. ווי צו פֿאַרבעסערן פּקר אָפּרוף עפעקטיווקייַט?

ימפּרוווינג די עפעקטיווקייַט פון פּקר ריאַקשאַנז קענען פירן צו העכער ייעלדס און מער פאַרלאָזלעך רעזולטאַטן.

אָפּטימיזירן אָפּרוף טנאָים: עקספּערימענט מיט פאַרשידענע קאַנסאַנטריישאַנז פון אָנפאַנגער, מוסטער דנאַ און מגקל 2. יעדער פּקר אָפּרוף קען דאַרפן יינציק טנאָים פֿאַר אָפּטימאַל פאָרשטעלונג.

ניצן הויך-פאַדעלאַטי ענזימעס: אויב די אַקיעראַסי איז קריטיש, באַטראַכטן ניצן אַ הויך-פאַדעלאַטי דנאַ פּאָלימעראַסע צו מינאַמייז ערראָרס בעשאַס אַמפּלאַפאַקיישאַן.

לייזונג: דורכפירן אַן אַפּטאַמאַזיישאַן עקספּערימענט צו געפֿינען די בעסטער טנאָים פֿאַר דיין ספּעציפיש פּקר סעטאַפּ.

אין קיצער

טראָובלעשאָאָטינג אַפּקר אַנאַליזערקענען זיין אַ דאָנטינג אַרבעט, אָבער צו פֿאַרשטיין פּראָסט פּראָבלעמס און זייער סאַלושאַנז קענען באטייטיק פֿאַרבעסערן דיין פּקר דערפאַרונג. דורך סאַלווינג די פּראָסט פּראָבלעמס, ריסערטשערז קענען פֿאַרבעסערן פּקר רעזולטאַטן און ענשור פאַרלאָזלעך רעזולטאַטן אין מאָלעקולאַר ביאָלאָגי אַפּלאַקיישאַנז. רעגולער וישאַלט, אָפּגעהיט סעלעקציע פון ​​רייידזשאַנץ און אַפּטאַמאַזיישאַן פון אָפּרוף טנאָים זענען שליסלען צו מצליח פּקר אַנאַליסיס.