ינטערפיראַנס סיבות אין פּקר ריאַקשאַנז

בעשאַס די פּקר אָפּרוף, עטלעכע ינטערפירינג סיבות זענען אָפט געפּלאָנטערט.
רעכט צו דער זייער הויך סענסיטיוויטי פון פּקר, קאַנטאַמאַניישאַן איז גערעכנט ווי איינער פון די מערסט וויכטיק סיבות וואָס ווירקן PCR רעזולטאַטן און קענען פּראָדוצירן פאַלש positive רעזולטאַטן.
גלייך קריטיש זענען די פאַרשידן מקורים וואָס פירן צו פאַלש-נעגאַטיוו רעזולטאַטן. אויב איינער אָדער מער יקערדיק פּאַרץ פון די פּקר געמיש אָדער די אַמפּלאַפאַקיישאַן אָפּרוף זיך זענען ינכיבאַטיד אָדער ינטערפירד, די דיאַגנאָסטיק אַסעס קענען זיין געשטערט. דאָס קען פירן צו רידוסט עפעקטיווקייַט און אפילו פאַלש נעגאַטיוו רעזולטאַטן.
אין אַדישאַן צו ינאַבישאַן, אָנווער פון ציל נוקלעיק זויער אָרנטלעכקייַט קען פּאַסירן רעכט צו שיפּינג און / אָדער סטאָרידזש טנאָים איידער די מוסטער צוגרייטונג. אין באַזונדער, הויך טעמפּעראַטורעס אָדער ינאַדאַקוואַט סטאָרידזש קען פירן צו שעדיקן פון סעלז און נוקלעיק אַסאַדז. צעל און געוועב פיקסיישאַן און פּעראַפאַן עמבעדדינג זענען באַוווסט סיבות פון דנאַ פראַגמאַנטיישאַן און אַ פּערסיסטענט פּראָבלעם (זען פיגיערז 1 און 2). אין די קאַסעס, אפילו אָפּטימאַל אפגעזונדערטקייט און רייניקונג וועט נישט העלפן.

פיגורע 1 | ווירקונג פון ימאָובאַליזיישאַן אויף דנאַ אָרנטלעכקייַט
אַגאַראָסע געל עלעקטראָפאָרעסיס האט געוויזן אַז די קוואַליטעט פון די דנאַ אפגעזונדערט פון פּעראַפאַן סעקשאַנז פון אָטאַפּסיעס וועריד באטייטיק. דנאַ פון פאַרשידענע דורכשניטלעך פראַגמענט לענגקטס איז געווען פאָרשטעלן אין די אויסצוגן דיפּענדינג אויף די פיקסיישאַן אופֿן. דנאַ איז געווען אפגעהיט בלויז ווען פאַרפעסטיקט אין געבוירן פאַרפרוירן סאַמפּאַלז און אין באַפערד נייטראַל פאָרמאַלין. די נוצן פון אַ שטאַרק אַסידיק בוין פיקסאַטיוו אָדער אַנבאַפערד פאָרמאַלין-מיט פאָרמאַלין ריזאַלטיד אין אַ באַטייטיק אָנווער פון דנאַ. די רוען בראָכצאָל איז העכסט פראַגמאַנטיד.
אויף די לינקס, די לענג פון פראַגמאַנץ איז אויסגעדריקט אין קילאָבאַסע פּערז (קבפּ)

פיגורע 2 | אָנווער פון אָרנטלעכקייַט פון נוקלעיק זויער טאַרגאַץ
(אַ) א 3′-5′ ריס אויף ביידע סטראַנדז וועט רעזולטאַט אין אַ ברעכן אין די ציל דנאַ. סינטעז פון דנאַ וועט נאָך פאַלן אויף די קליין פראַגמענט. אָבער, אויב אַ אָנפאַנגער אַנילינג פּלאַץ איז פעלנדיק אויף די דנאַ פראַגמענט, בלויז לינעאַר אַמפּלאַפאַקיישאַן אַקערז. אין די מערסט גינציק פאַל, די פראַגמאַנץ קענען רעסאַטוראַטע יעדער אנדערער, ​​אָבער די ייעלדס וועט זיין קליין און אונטער דיטעקשאַן לעוועלס.
(ב) אָנווער פון באַסעס, דער הויפּט רעכט צו דעפּורינאַטיאָן און טהימידינע דימער פאָרמירונג, פירט צו אַ פאַרקלענערן אין די נומער פון ה-באָנדס און אַ פאַרקלענערן אין Tm. בעשאַס די ילאָנגגייטאַד וואָרמינג פאַסע, די פּרימערז וועט צעשמעלצן אַוועק פון די דנאַ פון די מאַטריץ און וועט נישט אַנאַלייז אפילו אונטער ווייניקער שטרענג טנאָים.
(c) שכייניש טהימינע באַסעס פאָרעם אַ TT דימער.
אן אנדער פּראָסט פּראָבלעם וואָס אָפט אַקערז אין מאָלעקולאַר דיאַגנאָסטיקס איז די ווייניקער-ווי-אָפּטימאַל מעלדונג פון ציל נוקלעיק אַסאַדז קאַמפּערד מיט פענאָל-טשלאָראָפאָרם יקסטראַקשאַן. אין עקסטרעם קאַסעס, דאָס קען זיין פארבונדן מיט פאַלש נעגאַטיוועס. פיל צייט קענען זיין געראטעוועט דורך בוילינג ליסיס אָדער ענזימאַטיק דיידזשעסטשאַן פון צעל דעבריס, אָבער דעם אופֿן אָפט רעזולטאטן אין נידעריק פּקר סענסיטיוויטי רעכט צו ניט גענוגיק מעלדונג פון נוקלעיק זויער.

ינאַבישאַן פון פּאָלימעראַסע טעטיקייט בעשאַס אַמפּלאַפאַקיישאַן

אין אַלגעמיין, ינאַבישאַן איז געניצט ווי אַ קאַנטיינער באַגריף צו באַשרייַבן אַלע סיבות וואָס פירן צו סובאָפּטימאַל פּקר רעזולטאַטן. אין אַ שטרענג בייאָוקעמיקאַל זינען, ינאַבישאַן איז לימיטעד צו די טעטיקייט פון די ענזיים, דאָס הייסט, עס ראַדוסאַז אָדער פּריווענץ קאַנווערזשאַן פון סאַבסטרייט-פּראָדוקט דורך ינטעראַקשאַן מיט די אַקטיוו פּלאַץ פון די דנאַ פּאָלימעראַסע אָדער זייַן קאָפאַקטאָר (למשל, מג 2+ פֿאַר טאַק דנאַ פּאָלימעראַסע).
קאַמפּאָונאַנץ אין דער מוסטער אָדער פאַרשידן באַפערז און אויסצוגן מיט רייידזשאַנץ קענען גלייך ינכיבאַט די ענזיים אָדער טראַפּ זייַן קאָפאַקטאָרס (למשל EDTA), דערמיט ינאַקטיווייטינג די פּאָלימעראַסע און אין קער פירן צו דיקריסט אָדער פאַלש נעגאַטיוו פּקר רעזולטאַטן.
אָבער, פילע ינטעראַקשאַנז צווישן אָפּרוף קאַמפּאָונאַנץ און ציל-מיט נוקלעיק אַסאַדז זענען אויך דעזיגנייטיד ווי 'פּקר ינכיבאַטערז'. אַמאָל די אָרנטלעכקייַט פון דער צעל איז דיסראַפּטיד דורך אפגעזונדערטקייט און די נוקלעיק זויער איז באפרייט, ינטעראַקשאַנז צווישן די מוסטער און זייַן אַרומיק לייזונג און האַרט פאַסע קענען פּאַסירן. פֿאַר בייַשפּיל, 'סקאַוואַנדזשערז' קענען בינדן איין- אָדער טאָפּל-סטראַנדיד דנאַ דורך ניט-קאָוואַלענט ינטעראַקשאַנז און אַרייַנמישנ זיך מיט אפגעזונדערטקייט און רייניקונג דורך רידוסינג די נומער פון טאַרגאַץ וואָס יווענטשאַוואַלי דערגרייכן די פּקר אָפּרוף שיף.
אין אַלגעמיין, פּקר ינכיבאַטערז זענען פאָרשטעלן אין רובֿ גוף פלוידס און רייידזשאַנץ געניצט פֿאַר קליניש דיאַגנאָסטיק טעסץ (ורעאַ אין פּישעכץ, העמאָגלאָבין און העפּאַרין אין בלוט), דייאַטערי ביילאגעס (אָרגאַניק קאַמפּאָונאַנץ, גלייקאַדזשין, פעט, קאַ2+ ייאַנז) און קאַמפּאָונאַנץ אין דער סביבה (פענאָלס). , שווער מעטאַלס)

מער פאַרשפּרייט פּקר ינכיבאַטערז קענען זיין געפֿונען אין באַקטיריאַ און עוקאַריאָטיק סעלז, ניט-ציל דנאַ, דנאַ-ביינדינג מאַקראָמאָלעקולעס פון געוועב מאַטריץ און לאַבאָראַטאָריע ויסריכט אַזאַ ווי גלאַווז און פּלאַסטיקס. רייניקונג פון נוקלעיק אַסאַדז בעשאַס אָדער נאָך יקסטראַקשאַן איז די בילכער אופֿן פֿאַר רימוווינג פּקר ינכיבאַטערז.
הייַנט, פאַרשידן אָטאַמייטיד יקסטראַקשאַן ויסריכט קענען פאַרבייַטן פילע מאַנואַל פּראָטאָקאָלס, אָבער 100% אָפּזוך און / אָדער רייניקונג פון טאַרגאַץ איז קיינמאָל אַטשיווד. פּאָטענציעל ינכיבאַטערז קען נאָך זיין פאָרשטעלן אין די פּיוראַפייד נוקלעיק אַסאַדז אָדער קען האָבן שוין גענומען ווירקונג. עס זענען פאַרשידענע סטראַטעגיעס צו רעדוצירן די פּראַל פון ינכיבאַטערז. די ברירה פון די צונעמען פּאָלימעראַסע קענען האָבן אַ באַטייטיק פּראַל אויף ינכיבאַטער טעטיקייט. אנדערע פּראָווען מעטהאָדס צו רעדוצירן פּקר ינאַבישאַן זענען ינקריסינג פּאָלימעראַסע קאַנסאַנטריישאַן אָדער אַפּלייינג אַדאַטיווז אַזאַ ווי BSA.
ינאַבישאַן פון פּקר ריאַקשאַנז קענען זיין דעמאַנסטרייטיד דורך די נוצן פון ינערלעך פּראָצעס קוואַליטעט קאָנטראָל (IPC).
איר מוזן נעמען זאָרג צו באַזייַטיקן אַלע רייידזשאַנץ און אנדערע סאַלושאַנז אין די יקסטראַקשאַן ינווענטאַר, אַזאַ ווי עטאַנאָל, EDTA, CETAB, LiCl, GuSCN, SDS, יסאָפּראָפּאַנאָל און פענאָל, פון די נוקלעיק זויער יזאָלירן דורך אַ גרונטיק וואַשינג שריט. דעפּענדינג אויף זייער קאַנסאַנטריישאַן, זיי קען אַקטאַווייט אָדער ינכיבאַט פּקר.